为何要保持滤光片洁净?

为什么我们需要清洁光学滤镜?

目的:通过荧光显微镜评估脏滤光片的效果。

材料和方法:

“ 3T3”样品由Mike Davidson提供,Molecular Expressions™,由用BODIPY FL – Phallacidin标记的白化瑞士小鼠胚胎组成,使用Olympus BX41显微镜用Semrock FITC-3540B滤光片组成像。

使用干净的滤光片获取图像(图像-1),并使用相同的FITC立方体Cube获取另一幅图像(图像-2),其中二向色镜和发射滤光片的一个表面被指纹弄脏。最后,在没有样本的情况下,获取了第三张图像(图像3)以计算背景噪声。

为了确保结果不会因样品的光漂白而产生偏差,在使用干净的滤光片获取图像之前,先获取带有污脏滤光片的图像。

结果:

图像3的背景计数= 657.8

               

左图:使用清洁立方FITC,洁净的滤光片组:带有背景减法之后的Image-1。右图:使用污脏滤光片:带有背景减法之后的Image-2。红框:用于计算的计算感兴趣区域。

平均信号 左图 3148               右图2833

标准偏差 左图 296               右图272

平均信号变化百分比

(((3148 – 658)–(2833 – 658))/(3148 – 658)= 12.6%

结论:

稍微污脏的滤光片组会会导致严重的信号损失。因此,保持滤光片清洁很重要。

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